Die Este-Bibliothek besteht aus drei wichtigen Sammlungen, dem ehemaligen Besitz der Familie Este, der Campori-Sammlung und den Briefen Muratoris, und zählt über 412.000 Bände und Hefte, ferner 1.658 Inkunabeln, etwa 16.000 Bücher aus dem 16. Jahrhundert, wertvolle Handschriften mit Miniaturen, von denen viele in einer ständigen Ausstellung zu sehen sind, sowie eine wertvolle Sammlung musikalischer Handschriften. Die kostbarsten Kunstwerke der Bibliothek, die einen Eindruck von dem Reichtum der Bibliothek der Herzöge von Este geben, sind: die Bibel des Borso d'Este, welche Mitte des 15. Jahrhunderts in Ferrara entstand und deren 1.200 Seiten kostbare Miniaturen enthält; das Meßbuch von Borso; das Brevier des Ercole I d'Este, das De Sphaera, die Petites prières der Renée de France; der katalanische Globus sowie die Karte von Cantino, die zwischen 1498 und 1502 entstand und auf der bereits die Küste Amerikas dargestellt ist.